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1、實驗原理

SRANKL試劑盒是一種酶聯放大的兩步夾心法免疫檢測試劑盒。在此實驗中，標準品、質控品和未知樣品在包被了抗IGFBP-3單克隆抗體的微孔板中溫育。溫育之后洗板，再加入辣根過氧酶標記的抗IGFBP-3抗體。第二次溫育后再洗板，再向微孔中加入TMB底物液。之后再加入酸性終止液，用雙波長450nm和620nm檢測底物的酶反應程度。

檢測到的OD值直接與樣品中IGFBP-3的濃度成正比。實驗使用了一套IGFB-3標準品，用標準的OD值對IGFBP-3的濃度可做出一條標準曲線，之后質控品和未知樣品中的IGFBP-3濃度就可以從此標準曲線上定量得到。

2.成分

胰島素樣生長因子結合蛋白-3試劑盒為96孔檢測提供了足夠的試劑成份。每個試劑盒包括如下試劑成份：

注意：使用稀釋緩沖液作為零標準品

標準品的校準是使用NIBSC/WHO 重溶的IGFBP-3，參考試劑編號93/560。

3.沒有提供的材料

1 好質量的蒸餾水

2 移液器 50ul、100ul、1ml（使用一次性吸嘴）

3 塑料管，用于樣本稀釋

4 混合器

5 電磁攪拌器

6 洗板機

7 450nm酶標儀，參考波長650nm。

4.準備

標準品：

使用1ml的蒸餾水重溶標準品。使用稀釋緩沖液作為零標準品。

質控品：

使用1ml的蒸餾水重溶質控品。

酶聯物：

制備適當體積酶聯物溶液，例如：100ul的20倍濃縮的酶聯物加至2ml的酶聯物緩沖液中。使用混合器混勻，建議臨時制備。

洗滌液：

制備適當體積的即用型洗滌液，通過加入199份的蒸餾水至1份的200倍濃縮的洗滌液，使用一個電磁攪拌器混勻。

5.樣本的制備

血清必須保存在2-8℃

如果實驗沒有在24小時內進行，建議分裝保存在-20℃，避免反復凍融。使用前，所有的樣本應該平衡至室溫。建議使用前混勻樣本。

不能使用溶血的樣本。

6.SRANKL試劑盒實驗步驟：

1. 在塑料試管中標記好每個樣本

2. 每管加入1ml的稀釋緩沖液

3. 將10ul的樣本加入試管中

4. 混勻樣本，重溶好標準品和質控品

5. 每次實驗選擇好所需要的板條。不使用的板條應重新與干燥劑一起于密封袋中，保存在2-8℃。

6. 將板條固定于板架上

7. 移取100ul 的稀釋緩沖液當零標準品

8. 
   

 加入100ul的標準品、質控品、稀釋的樣本至相應的孔中

1. 每孔加入50ul的酶聯物溶液

2. 在室溫下溫育2小時

3. 倒出孔中溶液

4. 洗板3次

5. 在洗板后的15分鐘內，每孔加入100ul的顯色劑

6. 于室溫下溫育30分鐘

7. 每孔加入100ul的終止液

8. 在1小時內450nm酶標儀下讀數（參考波長為630nm或者650nm）。

7.應用范圍

該試劑盒為酶聯免疫試驗檢測人血清中的胰島素樣生長因子結合蛋白-3（IGFBP-3）。