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1、實驗原理

SRANKL試劑盒是一種酶聯(lián)放大的兩步夾心法免疫檢測試劑盒。在此實驗中，標準品、質(zhì)控品和未知樣品在包被了抗IGFBP-3單克隆抗體的微孔板中溫育。溫育之后洗板，再加入辣根過氧酶標記的抗IGFBP-3抗體。第二次溫育后再洗板，再向微孔中加入TMB底物液。之后再加入酸性終止液，用雙波長450nm和620nm檢測底物的酶反應(yīng)程度。

檢測到的OD值直接與樣品中IGFBP-3的濃度成正比。實驗使用了一套IGFB-3標準品，用標準的OD值對IGFBP-3的濃度可做出一條標準曲線，之后質(zhì)控品和未知樣品中的IGFBP-3濃度就可以從此標準曲線上定量得到。

2.成分

胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3試劑盒為96孔檢測提供了足夠的試劑成份。每個試劑盒包括如下試劑成份：

注意：使用稀釋緩沖液作為零標準品

標準品的校準是使用NIBSC/WHO 重溶的IGFBP-3，參考試劑編號93/560。

3.沒有提供的材料

1 好質(zhì)量的蒸餾水

2 移液器 50ul、100ul、1ml（使用一次性吸嘴）

3 塑料管，用于樣本稀釋

4 混合器

5 電磁攪拌器

6 洗板機

7 450nm酶標儀，參考波長650nm。

4.準備

標準品：

使用1ml的蒸餾水重溶標準品。使用稀釋緩沖液作為零標準品。

質(zhì)控品：

使用1ml的蒸餾水重溶質(zhì)控品。

酶聯(lián)物：

制備適當體積酶聯(lián)物溶液，例如：100ul的20倍濃縮的酶聯(lián)物加至2ml的酶聯(lián)物緩沖液中。使用混合器混勻，建議臨時制備。

洗滌液：

制備適當體積的即用型洗滌液，通過加入199份的蒸餾水至1份的200倍濃縮的洗滌液，使用一個電磁攪拌器混勻。

5.樣本的制備

血清必須保存在2-8℃

如果實驗沒有在24小時內(nèi)進行，建議分裝保存在-20℃，避免反復(fù)凍融。使用前，所有的樣本應(yīng)該平衡至室溫。建議使用前混勻樣本。

不能使用溶血的樣本。

6.SRANKL試劑盒實驗步驟：

1. 在塑料試管中標記好每個樣本

2. 每管加入1ml的稀釋緩沖液

3. 將10ul的樣本加入試管中

4. 混勻樣本，重溶好標準品和質(zhì)控品

5. 每次實驗選擇好所需要的板條。不使用的板條應(yīng)重新與干燥劑一起于密封袋中，保存在2-8℃。

6. 將板條固定于板架上

7. 移取100ul 的稀釋緩沖液當零標準品

8. 
   

 加入100ul的標準品、質(zhì)控品、稀釋的樣本至相應(yīng)的孔中

1. 每孔加入50ul的酶聯(lián)物溶液

2. 在室溫下溫育2小時

3. 倒出孔中溶液

4. 洗板3次

5. 在洗板后的15分鐘內(nèi)，每孔加入100ul的顯色劑

6. 于室溫下溫育30分鐘

7. 每孔加入100ul的終止液

8. 在1小時內(nèi)450nm酶標儀下讀數(shù)（參考波長為630nm或者650nm）。

7.應(yīng)用范圍

該試劑盒為酶聯(lián)免疫試驗檢測人血清中的胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3（IGFBP-3）。