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影響胎牛血清質量的幾大因素

2015-08-06 瀏覽次數:2137

市場上的胎牛血清種類繁多,魚龍混雜,很多科研工作者,特別是剛接觸細胞培養(yǎng)的人,難以分辨血清質量的優(yōu)劣。本人根據十多年來血清生產銷售的經驗,總結如下:

 

一、主要技術指標

 目前國內血清的質量標準是2005版的《中華人民共和國藥典》,主要指標有以下幾點:

 1、內毒素

標準為不高于5EU/ml。內毒素是細菌破碎后細胞壁的成分,因此內毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產一系列過程中的無菌操作情況。目前,國產血清基本都能達到這一要求,很多進口胎牛血清內毒素含量反而更高,如Gibco 26140,只要求不高于50EU/ml,高出我國標準10倍,即使是16000,也要10EU/ml,血清質量也未見影響。可見,內毒素含量偏高不影響質量,除非含量*,預示著已經污染。

 

2、總蛋白含量

胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數值偏高,說明采血的牛齡偏大,不是胎牛,數值偏低,表明血清可能摻水了。

 

3、血紅蛋白

標準為不高于20mg/dl,顏色越紅,數值越高,反之,數值越低。

 

4、pH

國產血清,大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關,這也能用來初步鑒別血清的來源。

 

5、微生物

包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等。隨著國內血清廠家生產條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型"微生物幾乎能100%控制,支原體經過0.1um過濾,大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的,主要是生產環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難*清除,但對血清質量影響不大。病原性病毒,特別是BVDV,在國產血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國產血清質量的重要因素之一,而進口胎牛血清中基本都控制的很好。

 

6、免疫球蛋白

國產血清的只是定性檢測,結果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數值能*體現(xiàn)出采血的時的牛齡情況,國產血清,基本都是新生牛的,血清中容易產生IgM,IgG的含量也偏高,進口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。

 

7、其它

不管是國產還是進口血清,都是不測抗生素的(無四環(huán)素胎牛血清除外)。國外,抗生素的使用很嚴格,用量也很少,每頭奶牛的產品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國內,抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象,血清中殘留很高,對細胞培養(yǎng)極為不利,這是國產血清質量差的根本原因。

 

二、血源

 市場上的血清血源主要分為中國、北美、南美和澳洲。

 1、國產血清質量差,這是*的,主要原因并不是生產廠家的責任,而是天然環(huán)境差和抗生素的大量使用。國內環(huán)境污染嚴重,同時飼養(yǎng)過程中抗生素極其濫用,有毒有害物質會大量殘留在血清中,zui終不利于細胞的生長。

 

2、南美血清,來源很多,如Bioind的巴拿馬、Gibco的烏拉圭、巴西等,這些血清由于采血的不可控性,質量參差不齊,當然,相對于國內血清來說好的多。另外,國內銷售的南美血清大多顏色鮮紅,如Bioind、Gibco、Hylone等品牌,但阿根廷的血清例外,這可能和各國的采血、生產工藝有關。

 

3、北美血清,主要來自美國和加拿大,如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類血清,等級越高的顏色越淡,表現(xiàn)為淡黃中帶一點微紅,SH30070和SH30396對比就很明顯,特級胎牛血清基本就能進行干細胞培養(yǎng)。北美血清還有一個顯著特點就是每瓶血清都能溯源,這對一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要。

 

4、澳洲血清,來源主要是新西蘭和澳大利亞,這是在北美血清禁運之后進入中國市場的,一般不具有溯源功能,由于生產、運輸等原因,價格相對來說比較貴。拿Gibco的10099和16000相比較,后者質量等級更高,顏色更淡,性價比更高。

 

三、外觀

 拿到血清,zui先接觸的是血清外觀,對于缺少細胞培養(yǎng)經驗的人來說,外觀的判斷尤為重要

 1、顏色

根據血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

 

國產血清的采血點很分散,大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當然,國產血清也很少有標準意義上的胎牛血清。

 

進口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂。

 

總的來說,國產的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進口的血清,質量的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,如Gibco 16000,差點的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當然,熱滅活血清或保存不當的血清,由于血紅蛋白的破壞氧化,會呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。

 

2、沉淀

很多血清客戶,會發(fā)現(xiàn)進口血清有沉淀,從而懷疑血清的質量問題,這是沒有根據的。

 

血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產生,對血清質量沒有任何影響,沉淀的產生原因很多,和廠家的加工生產方式密切相關。

 

國產的血清,大多來自北方,由于價格低廉,保存環(huán)境都不好,從采血、冷凍、運輸到生產會經過多次凍融,每次凍融過程,就會析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈",很少有沉淀產生。

 

進口的胎牛血清,過濾分裝前很少會反復凍融,生產后的成品也是清澈的,但隨著時間的推移,血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當然,進口的新生牛血清,一般牛齡都在2周左右,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生產后血清可能會渾濁,甚至有大量沉淀。

 

當然,購買回來的血清都是冰凍狀態(tài),使用時需要融化,融化過程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進行,否則沉淀相對較多,雖然沉淀并不直接影響血清的質量,但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。

 

3、澄清度

進口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而國產血清,因為絕大多數是新生牛血清,相對而言更加粘稠,顏色略深,這對于初步接觸血清的人很難判斷,但把兩者進行對比,可容易分辨。

 

來源:丁香通

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