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技術(shù)文章 / article
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ELISA試劑盒實驗操作注意事項

2019-11-03 瀏覽次數(shù):2793

一、實驗前將所有試劑平衡至室溫,包括樣本、TMB(非常重要)。


二、強烈建議老師在操作的時候每個樣本包括標準品做復(fù)孔(請務(wù)必這樣操作),因為這樣可以:

        •  求平均值,確保實驗結(jié)果的準確性

        •  對試劑盒的性能進行評估

        •  對自己的操作進行評估

        •  解決跳孔


三、為保證老師 ELISA 實驗結(jié)果準確 ,其中幾點重要的操作注意事項請務(wù)必參考:

如果以下表述與說明書中不一致,請按照實驗對應(yīng)說明書的要求操作 。

1、標準品溶解:標準品溶解嚴格按照說明書進行操作,建議老師進行標準品稀釋時,在EP管中進行。

2、孵育:說明書中進行孵育的時候,一定要用微孔板振蕩器振蕩,這個很重要,利于抗原抗體充分結(jié)合。

3、洗板:建議按照說明書操作,每次洗滌至少洗液浸泡30s,重復(fù)6次,洗板時間太短、次數(shù)太少會導(dǎo)致實驗效果不佳,延長洗板時間和增加洗板次數(shù)可以使背景更干凈。

4、如何控制標曲顯色?(僅針對雙抗夾心法ELISA試劑盒)

5 - 30分鐘顯色時間為經(jīng)驗范圍,每個具體的實驗,可根據(jù)以下情況,確定大致的顯色時間:

1) 肉眼觀察:標曲S5孔有淡藍色、Blank孔無明顯藍色時,即可終止。

2) 儀器判斷:630 nm左右波長下,標曲S1孔的OD值達到0.5 - 0.7、S5孔的OD值達到0.05 - 0.08、Blank孔的OD值小于0.05時,即可終止。

3) 高敏系列試劑盒因靈敏度更高,需嚴格控制顯色時長,可較普通試劑盒適當(dāng)縮短顯色時間。

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